آزمون لسیتیناز یا واکنش زرده¬ی تخم مرغ

                                                                                لسیتیناز

                                فسفوریل کولین    +  دی گلیسیرید                                      لسیتین                                           

 

مواد و روش ها

محیط کشت  NA: 500 سی سی

تخم مرغ: 1 عدد

آب مقطر استریل: 10 سی سی

این آزمایش بر اساس روش Fahy and Hayward انجام شد.

پس از اتولاو شدن 500 ml محیط NA و قبل از ریختن محیط داخل پتری­ها زمانی که دمای آن به 45-50 درجه رسید، زیر هود سطح خارجی یک تخم مرغ با الکل شسته و روی شعله گرفته سپس تخم مرغ شکسته شد و زرده­ی آن با 10 ml  آب مقطر استریل مخلوط گردید و بلافاصله به ارلن­ حاوی محیط NA منتقل شد و به هم زده­شد و سپس داخل پتری­های استریل پخش شد. پس از بستن محیط از باکتری مورد نظر به صورت نقطه­ای روی محیط های جداگانه کشت شد. پس از دو یا سه روز نتیجه­ی آزمون مورد بررسی قرار گرفت. نتیجه­ی مثبت آزمون تشکیل هاله­ی کدر در اطراف کلونی باکتری می­باشد.

علت ایجاد هاله در اطراف کلنی باکتری:

-        رها شدن چربی های آزاد از امولسیون زرده تخم مرغ،پس از شکسته شدن لسیتین (لسیتین در امولسیون زرده تخم مرغ نقش پایدار کننده را به عهده دارد)

-        پروتئین های نامحلول زرده تخم مرغ (ویتلین و ویتلنین) که در اثر آزاد شدن چربی ها رسوب می نمایند.

چربی که در اثر شکسته شدن لسیتین توسط لسیتیناز آزاد می شود

/ 0 نظر / 349 بازدید